Utilizamos neuronas en cultivo procedentes de cultivos primarios o preparaciones agudas de animales genéticamente modificados para estudiar la transmisión sináptica.

Uno de los modelos que utilizamos para estudiar la exocitosis y la endocitosis en neuronas del Sistema Nervioso Central (SNC) es el de unir proteínas fluorescentes a proteínas de las vesiculas sinápticas. Concretamente, utilizamos sinaptofluorina para estudiar el reciclado de vesículas. En neuronas del sistema nervioso es muy difícil aplicar la técnica de capacitancia, por la pequeñas dimensiones de los terminales nerviosos y su difícil accesibilidad para aplicar la técnica de patch clamp. En su lugar,  la sinaptofluorina (SpH) (Miesenbock et al, Nature 394: 192-5, 1998) es una herramienta muy útil pues revela cuando se produce la éxocitosis y aspectos de la endocitosis que son silentes a la técnica de capacitancia.  Esta proteína consiste en unir a la proteína vesicular sinaptobrevina, la GFP (proteína fluorescente verde).

En este esquema se muestra el principio por el cuál la sinaptofluorina permite estudiar exocitosis y endocitosis en neuronas del SNC. Los protones, responsables de mantener  un pH ácido (5,5) el interior de las vesículas sinápticas, hacen que esté apagada la proteína. Cuando se produce exocitosis, los protones salen al exterior a través del poro de fusión, ocasionando la basificación del interior vesicular (pH=7,4) y provocando el encendido de la SpH. Cuando se produce endocitosis o el cierre del poro de fusión,  la bomba de protones introduce protones nuevamente en el interior vesicular, ocasionando la acidificación y apagado de la SpH. El encendido es un proceso rápido, mientras que el apagado, depende de la actividad de la cinética de la endocitosis y la velocidad de la  bomba de protones para reacidificar el interior vesicular. Mediante esta técnica se pueden estudiar aspectos, como por ejemplo la etapa de reacidifcación vesicular, que es silente a la técnica de capacitancia.

Configuración de la técnica de patch amperometry. Se mide la capacidad del parche de membrana bajo la pipeta en la configuración de cell attached. Por tanto se mide exocitosis de vesículas de secreción que se funden con la membrana del parche. La liberación ocurre, pues, al interior de la pipeta de patch clamp. Para determinar la liberación de catecolaminas, el detector amperométrico se sitúa en el interior de la pipeta.

El baño es conectado al "head stage" del amplificador de patch que mide capacidad. 

Registro de eventos en patch amperometry en una célula cromafín de rata. Eventos reversibles e irreversibles medidos con esta técnica.